---zastosowanie-na-czym-polega-technika-pcr.jpg)
PCR adalah ujian yang telah digunakan dalam diagnosis banyak penyakit. Kaedah PCR memungkinkan untuk menunjukkan kehadiran langsung bakteria dalam organisma, dan khususnya DNAnya. Ujian PCR digunakan, antara lain dalam diagnosis penyakit Lyme. Apakah teknik PCR? Apakah PCR masa nyata?
Isi kandungan:
- PCR (pengujian) - apakah teknik PCR?
- PCR (penyelidikan) - penerapan kaedah PCR
- PCR (penyelidikan) - Penyakit Lyme
- PCR (penyelidikan) - hasil. Bolehkah mereka positif positif?
- PCR (penyelidikan) - hasil. Bolehkah mereka negatif palsu
PCR (tindak balas rantai polimerase) adalah kaedah asas yang digunakan di makmal genetik dan molekul. Ia dikembangkan pada tahun 1983 oleh Kara Mullis, yang dianugerahkan Hadiah Nobel pada tahun 1993 untuknya.
Dengarkan apa teknik pengujian PCR. Ini adalah bahan dari kitaran YANG MENDENGAR. Podcast dengan petua.
Untuk melihat video ini, sila aktifkan JavaScript, dan pertimbangkan untuk meningkatkan ke penyemak imbas web yang menyokong video
PCR (pengujian) - apakah teknik PCR?
Ujian PCR terdiri daripada beberapa penguatan (biasanya dalam 30-40 siklus) fragmen DNA tertentu, misalnya gen yang mengekod protein Borrelia, dengan penggunaan enzim polimerase.
Kemudian, pewarna molekul khas digunakan untuk membuat serpihan DNA yang diperkuat kelihatan. PCR, kerana penguatan serpihan DNA tertentu, adalah kaedah yang sangat sensitif.
Dalam kaedah PCR, serpihan DNA diperkuat menggunakan pasangan primer tertentu untuk wilayah tertentu DNA bakteria. Sebagai contoh, kawasan sasaran dalam PCR yang digunakan dalam diagnosis penyakit Lyme adalah gen yang mengekod protein, mis. 16S rDNA, recA, fla, p66, OspA.
Bahan biologi dari mana ujian dapat dilakukan adalah:
- darah
- bahagian kulit dari eritema yang berpindah
- cecair serebro-tulang belakang
- cecair sinovial atau dari tulang rawan artikular
- air kencing
PCR (penyelidikan) - penerapan kaedah PCR
Selain diagnosis Lyme borreliosis menggunakan kaedah PCR, adalah mungkin untuk mengesan serpihan DNA spesifik mikroorganisma atau manusia lain. Oleh itu, kaedah PCR juga digunakan dalam:
- diagnosis dan pemantauan jangkitan virus: virus herpes (virus herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, sitomegalovirus), HIV, virus hepatitis (HBV dan HCV)
- diagnostik dan pemantauan jangkitan bakteria, terutama bakteria yang tidak dapat dikenali melalui kultur, seperti tuberkulosis
- diagnostik dan pemantauan penyakit neoplastik: leukemia, barah payudara, barah kolorektal, barah paru-paru
- diagnosis kecenderungan kanser: barah payudara dan ovari (gen BRCA1 dan BRCA2), barah kolorektal (gen APC dan CHEK2)
- diagnostik penyakit genetik: hemochromatosis (gen HFE), talasemia (gen HBA1 dan HBA2), penyakit seliak (gen HLA)
- ujian bapa, yang mengesan keserasian DNA anak dan bapa
Pada masa ini, terdapat banyak pengubahsuaian kaedah PCR. Sebagai contoh, dalam diagnosis Lyme borreliosis, kaedah PCR bersarang dan PCR masa nyata digunakan. Yang terakhir adalah kaedah kuantitatif dan memungkinkan penentuan bilangan salinan DNA Borrelia yang tepat dalam bahan biologi yang diuji.
PCR (penyelidikan) dan penyakit Lyme
Ujian serologi adalah asas untuk diagnosis penyakit Lyme. Walau bagaimanapun, terdapat situasi klinikal yang boleh menyebabkan ujian ini menjadi negatif palsu:
- tetingkap serologi, iaitu tempoh awal jangkitan di mana tubuh belum menghasilkan antibodi IgM dan IgG spesifik terhadap Borrelia spirochetes
- pada orang dengan kekurangan imuniti yang tidak menghasilkan antibodi yang mencukupi
- kehadiran kompleks imun yang terdiri daripada antigen Borrelia dan antibodi spesifik untuknya dan mencegah pengesanan antibodi menggunakan kaedah serologi
Sekiranya gejala penyakit Lyme dicurigai pada pesakit dan hasil ujian serologi adalah negatif, ujian molekul berdasarkan kaedah PCR dapat dilakukan.
DNA spirochetes Borrelia dapat dikesan pada tahap awal infeksi, kerana jumlah spirochetes dalam cairan tubuh adalah yang paling tinggi.
Dalam diagnosis boreliosis Lyme, kaedah serologi seperti ELISA digunakan terutamanya, tetapi dalam beberapa keadaan klinikal ujian genetik menggunakan kaedah PCR sangat membantu.
Semakin lama masa jangkitan, semakin kecil kemungkinannya untuk mengesan DNA bakteria. Oleh itu, dalam beberapa kes, sebelum ujian PCR dilakukan, bakteria ditanam di media khas selama 1-2 minggu dan kemudian ujian dilakukan.
Pendekatan ini digunakan dalam kes kecurigaan penyakit Lyme dan cairan serebrospinal yang dituai. Pada fasa akhir jangkitan, lebih tepat untuk melakukan ujian ELISA.
Kaedah PCR tidak boleh digunakan dalam diagnosis rutin Lyme borreliosis kerana kurangnya standardisasi mengenai kejadian varietas Borrelia burgdorferi di Poland.
Namun, dalam kes kesukaran dalam diagnosis (terutama pada tahap awal penyakit), hasil ujian PCR membantu dalam proses diagnostik.
Hasil ujian positif bermaksud bahawa kehadiran DNA Borrelia burgdorferi dan jenisnya dikesan dalam bahan yang diuji, tetapi ia tidak menjelaskan sama ada jangkitan aktif berlaku di dalam badan. Sebaliknya, hasil negatif tidak mengecualikan kehadiran bakteria di dalam badan.
Beberapa makmal menawarkan pengujian untuk keberadaan DNA Borrelia dalam kutu. Walau bagaimanapun, hasil pemeriksaan sedemikian bukanlah asas untuk diagnosis penyakit Lyme pada orang yang digigit.
Artikel yang disyorkan:
Ujian ELISA - apa yang dikesannya? Bagaimana membaca hasilnya? Harga ujianPCR - hasil. Bolehkah mereka positif positif?
PCR adalah kaedah yang sangat sensitif dan pada masa yang sama sangat sensitif terhadap pencemaran. Oleh itu, sangat mustahak dalam ujian berasaskan PCR untuk memilih kawalan dalaman yang sesuai untuk mengesampingkan positif palsu.
Kuncinya juga adalah koleksi bahan yang betul untuk ujian serta pengalaman dan kebolehpercayaan doktor yang menjalankan ujian.
PCR - hasil. Bolehkah mereka negatif palsu
Seperti dalam ujian makmal, juga dalam kaedah PCR, hasil negatif palsu mungkin muncul. Di sini sangat penting untuk mengumpulkan darah untuk antikoagulan yang sesuai, kerana sebahagian daripada mereka, seperti heparin, dapat menghalang reaksi PCR.
Juga, pengumpulan bahan setelah permulaan terapi antibiotik dapat menyebabkan penurunan efisiensi reaksi PCR dan kemungkinan besar hasil negatif palsu.
Perlu juga diingat bahawa bakteria Borrelia hidup dalam waktu yang sangat singkat dalam darah dan cairan tubuh, kerana berkat reseptor khas, mereka menembusi dengan cepat ke tempat-tempat "sukar dijangkau" di dalam badan.
Oleh itu, berbeza dengan diagnostik mikroorganisma lain, bilangan spirochetes Borrelia dalam bahan biologi adalah sedikit, kadang-kadang walaupun pada tahap pengesanan kaedah PCR. Ini juga boleh menyebabkan negatif palsu.
Artikel yang disyorkan:
Ujian transformasi limfosit (LTT)Sastera
- Dunaj J. et al. Kepentingan kaedah PCR dalam diagnosis Lyme borreliosis. Semak imbas Epidemiol. 2013, 67, 119 - 123.
- Diagnostik makmal penyakit bawaan Cadangan Kumpulan Kerja: Ahli Diagnostik Makmal Kebangsaan, Institut Kesihatan Nasional-Institut Kebersihan Nasional, Perunding Negara dalam bidang penyakit berjangkit, Jabatan Penyakit Berjangkit dan Neuroinfeksi, Universiti Perubatan Białystok, Persatuan Virologi Poland, Warsaw 2014.
- Ružić-Sabljić E. dan Cerar T. Kemajuan dalam diagnosis molekul penyakit Lyme. Diagnosis Pakar Rev Mol. 2017 Jan; 17 (1): 19-30.
- Valones M.A.A. et al. Prinsip dan aplikasi tindak balas rantai polimerase dalam bidang diagnostik perubatan: tinjauan. Braz J Microbiol. 2009 Jan-Mar; 40 (1): 1-11.
---zastosowanie-na-czym-polega-technika-pcr_1.jpg)
