Ujian ELISA mengesan banyak penyakit, sebab itulah ia banyak digunakan dalam perubatan dan banyak lagi. Walau bagaimanapun, ujian ELISA terkenal dengan diagnosis penyakit Lyme. Apakah ujian ELISA? Bagaimana mentafsirkan hasilnya? Berapakah harga ujian?
Isi kandungan:
- Ujian ELISA - apa yang dikesannya? Permohonan ujian ELISA
- Ujian ELISA - apakah ujiannya?
- Ujian ELISA dan penyakit Lyme - bila hendak dilakukan?
- Ujian ELISA - harga. Berapa kos ujian ELISA?
- Ujian ELISA - keputusan. Bolehkah mereka positif positif?
- Ujian ELISA - keputusan. Bolehkah mereka negatif palsu?
Ujian ELISA, iaitu ujian imunosorben berkait enzim, adalah kaedah makmal yang biasa digunakan, antara lain, untuk pengesanan kuantitatif antibodi dalam darah.
Atas sebab ini, ujian ELISA telah menemukan aplikasi dalam diagnosis penyakit bakteria, seperti Lyme borreliosis.
Kelebihan kaedah ELISA adalah kesederhanaan dan kemungkinan pelaksanaan yang cepat serta kepekaan yang tinggi. Kaedah ELISA dilakukan dengan menggunakan plat plastik khas dengan sumur yang diisi dengan contohnya protein Borrelia (antigen) dan antibodi monoklonal tertentu, yang dirancang untuk mengesan antibodi dalam sampel pesakit.
Ujian ELISA - apa yang dikesannya? Permohonan ujian ELISA
Kepekaan dan kesederhanaan kaedah ELISA yang tinggi menjadikannya dapat digunakan dalam diagnosis banyak penyakit, tetapi lebih dikenali sebagai kaedah diagnostik penyakit Lyme.
Dalam kes diagnosis Lyme borreliosis, yang disebut ELISA tidak langsung, yang memungkinkan untuk mengesan IgM atau IgG tertentu dalam bahan yang diuji. Dengan cara yang sama, antibodi dapat dikesan untuk diagnosis:
- jangkitan virus: virus herpes (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, sitomegalovirus), HIV, virus hepatitis (HBV dan HCV)
- jangkitan protozoa: toxoplasmosis, giardiasis
- penyakit autoimun: penyakit seliak (antibodi anti-tTG atau anti-DPG), penyakit Hashimoto (antibodi anti-TG dan anti-TPO), penyakit radang usus (antibodi anti-ASCA dan anti-ANCA)
- penyakit parasit dan alahan di mana antibodi IgE tertentu dikesan. Tahap peningkatan mereka mungkin menunjukkan adanya alergi, misalnya pada debunga dan makanan, atau pencerobohan parasit (cacing pita bersenjata, cacing bulat manusia)
Terdapat juga modifikasi kaedah ELISA (yang disebut sandwich ELISA), yang memungkinkan pengesanan sampel protein selain antibodi. Kemudian tujuan ujian ini adalah untuk mengesan bahan biologi:
- serpihan virus atau bakteria, selalunya ia adalah ciri antigen untuk patogen tertentu
- hormon serum, misalnya estrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortisol
- enzim, misalnya calprotectin, elastase pankreas, fosfatase alkali
- penanda tumor, contohnya CA-125
- kehadiran ubat dalam serum
Kaedah ini juga berlaku di industri makanan, di mana ia dapat mengesan jejak alergen (mis. Susu, kacang tanah), GMO atau racun dalam makanan.
Ujian ELISA - apa itu?
Diagnosis, misalnya, Lyme borreliosis menggunakan kaedah ELISA terdiri dalam mengesan protein imun dalam bahan biologi - antibodi yang timbul semasa tindak balas terhadap antigen Borrelia.
Antibodi diuji dalam dua kelas, IgM dan IgG. IgM adalah antibodi pertama yang muncul di dalam badan ketika mereka bersentuhan dengan bakteria, dan ia menurun dari masa ke masa.
Tempat mereka diambil oleh antibodi IgG yang lebih berterusan yang dapat tinggal di dalam badan selama beberapa lusin tahun.
Dengan cara ini, kehadiran bakteria di dalam badan secara tidak langsung diuji dengan mengesan antibodi yang secara khusus diarahkan terhadap Borrelia spirochetes.
Antibodi pada pelbagai peringkat jangkitan boleh diarahkan terhadap pelbagai protein Borrelia. Sebagai contoh, pada peringkat awal adalah protein p41.
Pada peringkat kemudian, semakin banyak protein mula muncul, seperti p21, p30, p39, p43. Inilah sebab mengapa diagnosis penyakit Lyme sangat sukar.
Pemilihan protein bakteria sangat penting agar ujian mempunyai nilai diagnostik yang tinggi. Oleh itu, secara rutin dalam diagnosis penyakit Lyme, ujian ELISA generasi II atau generasi III harus digunakan, di mana set protein dipilih untuk mendapatkan hasil yang paling dipercayai.
Ujian ELISA dan penyakit Lyme. Bilakah perlu dilakukan?
Lyme borreliosis adalah penyakit bakteria yang disebabkan oleh bakteria Borrelia burgdorferi dan banyak jenisnya.
Diagnosis penyakit ini tidak mudah kerana kerumitan tindak balas imun terhadap Borrelia dan ketidaksempurnaan kaedah makmal.
Kaedah makmal yang paling biasa digunakan adalah kaedah ELISA yang sangat sensitif, yang mengesan antibodi spesifik yang timbul terhadap protein bakteria.
Dalam diagnosis Lyme borreliosis, kaedah ELISA tidak langsung digunakan di mana tahap berikut dibezakan:
- pengeraman telaga di piring dengan bahan yang dikumpulkan dari pesakit, misalnya serum. Sekiranya terdapat antibodi terhadap Borrelia dalam bahan yang diuji, mereka mengikat protein di bahagian bawah reaksi dengan baik
- maka lebihan serum dibilas dengan cecair pencuci khas (buffer) dan yang disebut konjugasi, yang merupakan antibodi yang berkaitan dengan enzim yang mengikat antibodi yang dihubungkan sebelumnya dalam telaga reaksi
- maka substrat untuk konjugat ditambahkan dan tindak balas warna berlaku (hasil positif) atau tidak ada reaksi warna (hasil negatif)
- langkah terakhir adalah pembacaan oleh pembaca (spektrofotometer) kepekatan antibodi terhadap Borrelia dalam serum pesakit
Kaedah ELISA untuk penyakit Lyme dilakukan dari darah, dan dalam kes gejala neurologi (neuroborreliosis), juga dari cairan serebrospinal.
Cecair sinovial tidak boleh diuji kerana terdapat kemungkinan keputusan positif palsu.
Asas untuk diagnosis penyakit ini adalah gejala klinikal yang menunjukkannya, disahkan oleh hasil ujian makmal.
Penambahan hasil ujian makmal tanpa gejala tidak membenarkan diagnosis penyakit Lyme, kerana telah terbukti bahawa antibodi terhadap Borrelia juga dikesan pada orang yang sihat.
Diagnosis serologi Lyme borreliosis bermula dengan ujian ELISA saringan semi-kuantitatif. Sekiranya hasilnya negatif, ini bermakna tidak ada spirochetes Borrelia yang terdeteksi atau hasilnya adalah negatif palsu.
Sekiranya hasilnya positif atau lemah secara positif (samar-samar), ujian pengesahan Western blot, yang ditandai dengan kekhususan tinggi, harus dilakukan.
Ini untuk mengesahkan "kebenaran" hasil yang diperoleh dengan kaedah ELISA. Semasa diagnostik, anda tidak boleh melewati salah satu langkah di atas dan, misalnya, melakukan diagnosis menggunakan kaedah Western blot dengan segera atau membuat diagnosis berdasarkan hasil ELISA positif sahaja.
Di Poland, diagnosis penyakit Lyme sangat sering berakhir pada peringkat saringan pertama, yang menyebabkan salah tafsiran hasil positif atau lemah.
Artikel yang disyorkan:
Ujian transformasi limfosit (LTT) Baik diketahuiUjian ELISA - harga. Berapa kos ujian ELISA?
Ujian ini berharga kira-kira PLN 60 dan dilakukan dengan segera. Walau bagaimanapun, anda boleh menunggu kira-kira tiga bulan untuk mendapatkan hasil rujukan.
Ujian ELISA - keputusan. Bolehkah mereka positif positif?
Hasil positif palsu adalah hasil tindak balas silang antibodi IgM dengan protein lain. Antibodi yang dihasilkan oleh badan mungkin 'salah' mengenali antigen dari mikroorganisma lain sebagai antigen Borrelia.
"Kesalahan" yang paling biasa berlaku pada orang yang dijangkiti treponema pallidum, virus herpes dan pada orang dengan lupus eritematosus sistemik dan penyakit reumatik lain.
Ujian ELISA - keputusan. Bolehkah mereka negatif palsu?
Hasil negatif palsu mungkin muncul pada tahap awal infeksi, dalam hal ini ujian harus diulang setelah sekitar 3-4 minggu. Ini dipanggil tetingkap serologi, itu adalah tempoh awal jangkitan di mana tubuh belum "berjaya" menghasilkan antibodi spesifik.
Begitu juga, pada orang dengan kekurangan imuniti yang tidak menghasilkan antibodi yang mencukupi.
Masalah besar, terutamanya dalam jangkitan yang sangat sengit, adalah penampilan yang disebut kompleks imun yang terdiri daripada antigen Borrelia spirochetes dan antibodi khusus untuknya.
Akibatnya, antibodi menjadi "tidak terlihat" untuk kaedah yang biasa digunakan seperti ELISA, dan walaupun terdapat dalam bahan yang diuji, mereka tidak dapat dikesan.
Dalam kes sedemikian, makmal boleh menggunakan kompleks imun yang rosak. Rawatan ini dirancang untuk melepaskan antibodi. Walau bagaimanapun, kaedah ini tidak digunakan secara meluas kerana kurangnya standardisasi di makmal.
Perlu diketahuiMengapa diagnosis penyakit Lyme tidak mudah?
Ini disebabkan kerumitan tindak balas imun terhadap Borrelia dan keterbatasan kaedah makmal. Kepelbagaian varietas dan kemunculan yang baru yang menyebabkan jangkitan, terutama di benua Eropah, tidak memudahkan pengembangan kaedah diagnostik yang berkesan.
Lebih banyak varieti baru-baru ini muncul di Eropah, seperti Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana dan Borrelia spielmanii. Selain itu, dalam tubuh, spiralet Borrelia dapat berubah menjadi kista atau tinggal di tempat-tempat tubuh yang tidak dapat diakses oleh sel-sel sistem imun.
Oleh itu "tidak kelihatan" pada sistem imun. Selain itu, telah terbukti bahawa tisu-tisu tersebut mungkin mengandungi serpihan bakteria yang mempunyai sifat pro-radang. Mereka dipercayai bertanggungjawab terhadap simptom kronik penyakit Lyme, walaupun keputusan ujian makmal negatif.
Sastera
1. Witecka-Knysz E. et al. Penyakit Lyme: mengapa diagnosis begitu sukar? Pakar Diagnostik Makmal April 2007.
2. Moore A. et al. Garis Panduan Semasa, Kesalahan Klinikal Umum, dan Arah Masa Depan untuk Diagnosis Makmal Penyakit Lyme, Amerika Syarikat. Muncul Dis. 2016 Jul; 22 (7).
3. Diagnostik makmal penyakit bawaan kutu.Cadangan Kumpulan Kerja: Dewan Diagnostik Makmal Kebangsaan, Institut Kesihatan Umum-Institut Kebersihan Nasional, Perunding Nasional dalam bidang penyakit berjangkit, Jabatan Penyakit Berjangkit dan Neuroinfeksi, Universiti Perubatan Białystok, Persatuan Virologi Poland, Warsaw 2014
4. Hosseini S. et al .: Uji Imunosorben Berkaitan Enzim (ELISA) Dari A hingga Z. Springer 2017.
